Ultrastructural Analysis of Transcription and Splicing in the Cell Nucleus after Bromo-UTP Microinjection

Perichromatine regio’s zijn de meest belangrijke sites van de nucleaire RNA transcriptie en de perichromatine fibrillen (PF’s) zijn de ontwikkelende RNA transcripts. Transcriptie vindt plaats in een diffuus patroon, er is niet echt sprake van locale accumulatie van sites.

PF’s zijn ook de grootste sites waar pre-mRNA processing plaatsvindt.

In de clusters van de interchromatine granula (IGC’s) wordt geen pre-mRNA geprocessed en vindt geen polyadenylation (3’ end processing) plaats.

IGF gerelateerde sites bevatten RNA polymerase II, een aantal transcriptiefactoren en na een tijdje incuberen met Br-UTP, ook met broom gelabeled RNA. Dit zijn de perichromatine fibrillen (PF’s).

In de nucleolus vindt transcriptie plaats in het dichte fibrillaire compartiment.

- Introduction

RNA transcriptie en processing vindt plaats in bepaalde afgescheiden subnucleaire structuren. Uit eerdere studies is gebleken dat vooral de grens van het gecondenseerde chromatine dient als transcriptie plaats.

PF’s zijn de in situ vorm van ontwikkelende RNA transcripts; een deel van deze PF’s migreren tijdens het processen naar de interchromatine ruimte.

Splicing en polyadenylation (3’ end processing) vindt ook plaats in associatie met de PF’s.

De IGC’s worden gezien als de primaire sites, waar de verschillende splicing factoren worden verzameld in processing complexen. Deze processing complexen (processosomes) gaan naar de nucleaire domeinen waar transcriptie plaatsvindt.

De interfase nucleus is een dynamisch geheel. De interactie tussen mRNA en de verschillende mRNA processing processen is afhankelijk van de transcriptie staat van de kern.

Om na te gaan waar de transcriptie plaatsvindt, werd Br-UTP gemicro-injecteerd; dit om te zien waar mRNA wordt getranscribeerd en waar het mRNA naartoe gaat na transcriptie.

Hier wordt aangetoond dat PF’s de grootste nucleaire domeinen zijn, die gelabeled zijn met Broom, na korte BrUTP pulsen. Belangrijke pre-mRNA transcriptie en processing factoren zijn vooral geassocieerd met de PF’s.

Dus PF’s zijn niet alleen de sites van ontwikkelende mRNA transcripts, maar ook de sites van pre-mRNA processing.